Determinación de Uridina 5'-Monofosfato en Fortificantes Nutricionales de Alimentos por Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento

Como nucleótido, el monofosfato de uridina 5'- (UMP) es un intermediario fundamental en el metabolismo de los ácidos nucleicos dentro de los organismos vivos. Es el nucleótido más abundante en la leche de los mamíferos, y la necesidad dietética de uridilato es significativamente mayor que la de otros nucleótidos durante el crecimiento y desarrollo de la descendencia. En los últimos años, la investigación ha revelado que el UMP no solo participa en el metabolismo energético y la síntesis de ARN, sino que también mejora la función de la barrera intestinal al modular las vías de señalización celular. Además, actúa sinérgicamente con las vitaminas liposolubles para promover la absorción de nutrientes y la función inmunológica. El UMP se añade comúnmente como fortificante nutricional a la fórmula infantil y a los piensos para ganado/aves de corral, donde su pureza y concentración impactan directamente en el valor nutricional y la seguridad del producto final.

Palabras clave:Fortificante nutricional alimentario, UMP, Nucleótidos, Cromatografía líquida de alto rendimiento.

1. Instrumentos y reactivos

1.1 Lista de configuración de HPLC

Tabla 1 Lista de configuración de HPLC

1.2 Reactivos y estándares

Tabla 2 Lista de reactivos y estándares

1.3 Material experimental y equipo auxiliar

Limpiador ultrasónico

Mezclador Vortex

2. Método y condiciones experimentales

Columna de cromatografía: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Resultado del experimento

3.1 Prueba de idoneidad del sistema

La prueba de idoneidad del sistema demostró que el pico objetivo tenía una buena forma, con un alto número de platos teóricos y sin picos interferentes en sus proximidades, cumpliendo así todos los requisitos experimentales.

Fig 1 Cromatograma de la solución de trabajo estándar de monofosfato de uridina 5'-

Tabla 3 Resultados de la prueba para la solución de trabajo estándar de monofosfato de uridina 5'-

3.2 Prueba de repetibilidad

La solución de trabajo estándar de monofosfato de uridina 5'- (UMP) se inyectó seis veces. La desviación estándar relativa (RSD) del tiempo de retención fue del 0.085%, y la del área del pico fue del 0.191%. Ambos valores estuvieron por debajo del límite especificado del 2.0%, lo que demuestra el cumplimiento de los requisitos experimentales.

Fig 2 Cromatogramas de la prueba de repetibilidad de monofosfato de uridina 5'- (UMP)

Tabla 4 Resultados de la prueba de repetibilidad para el monofosfato de uridina 5'- (UMP)

3.3 Prueba de muestra

El área del pico de la solución de trabajo estándar de monofosfato de 5'-uridina (20 mg/L) fue de 322.525, mientras que la de la solución de muestra de prueba fue de 274.211. Basado en el método del estándar externo, se determinó que el contenido de UMP en la muestra era de 17 mg/L.

Fig 3 Cromatograma de la muestra de prueba

Tabla 5 Resultados de la prueba de muestra

3.4 Prueba de idoneidad del sistema para sustancias relacionadas

La prueba de la solución de idoneidad del sistema para sustancias relacionadas demostró que todos los picos de los compuestos tenían buena forma, con altos números de platos teóricos y una resolución superior a 2.0, cumpliendo así los requisitos experimentales.

Fig 4 Cromatograma de la solución de trabajo estándar de monofosfato de uridina 5'- (UMP)

Tabla 6 Resultados de la prueba para la solución de trabajo estándar de monofosfato de uridina 5'- (UMP)

3.5 Prueba de reproducibilidad de la muestra

Después de seis inyecciones consecutivas de la solución de idoneidad del sistema, la repetibilidad del tiempo de retención para 5'-UMP, uracilo y uridina fue del 0.031%, 0.058% y 0.102%, respectivamente, mientras que la repetibilidad del área del pico fue del 0.243%, 0.134% y 0.134%, respectivamente, cumpliendo los requisitos experimentales.

Fig 5 Cromatograma de la prueba de reproducibilidad de la muestra

Tabla 7 Resultados de la prueba de repetibilidad del tiempo de retención de sustancias relacionadas

Tabla 8 Resultados de la prueba de repetibilidad del área del pico de sustancias relacionadas

3.6 Prueba de sensibilidad para sustancias relacionadas

La relación señal-ruido del pico principal de 5'-UMP en la solución de prueba de sensibilidad para sustancias relacionadas es significativamente mayor que 3, cumpliendo los requisitos experimentales.

Fig 6 Cromatograma de la solución de prueba de sensibilidad de sustancias relacionadas

Tabla 9 Resultados de la prueba de la solución de sensibilidad de sustancias relacionadas

3.7 Prueba de soluciones de referencia y muestra de sustancias relacionadas

El área del pico de la solución de referencia (17 mg/L) fue de 275.856. El área total del pico de impurezas en la solución de prueba, excluyendo el monofosfato de 5'-uridina, fue de 38.021. El cálculo por el método del estándar externo, el contenido de impurezas en la muestra es de 2.343 mg/L.

Fig 7 Cromatograma de la prueba de la solución de referencia de sustancias relacionadas

Tabla 10 Resultados de la prueba de la solución de referencia de sustancias relacionadas

Fig 8 Cromatograma de la prueba de la solución de muestra de sustancias relacionadas

Tabla 11 Resultados de la prueba de la solución de muestra relacionada

4. Conclusión

En este experimento, con referencia a "GB 1903.69-2024 Norma Nacional de Seguridad Alimentaria: Potenciador nutricional alimentario 5'-Monofosfato de Uridina", el análisis se realizó utilizando un sistema de cromatografía líquida de alto rendimiento Wayeal LC3200 equipado con un detector ultravioleta. Los resultados experimentales muestran que la prueba de idoneidad del sistema demostró buenas formas de pico para todos los compuestos, altos números de platos teóricos y una resolución superior a 2.0, cumpliendo los requisitos experimentales. La repetibilidad del tiempo de retención para la solución de trabajo estándar de 5'-Monofosfato de Uridina y las sustancias relacionadas fue inferior al 0.2%, y la repetibilidad del área del pico fue inferior al 0.3%, lo que indica una buena reproducibilidad. La solución de prueba de sensibilidad para sustancias relacionadas mostró una relación señal-ruido para el pico principal de 5'-Monofosfato de Uridina significativamente mayor que 3, cumpliendo los requisitos experimentales. Todos los resultados de las pruebas de muestra fueron normales. Los datos anteriores cumplen con los requisitos del instrumento especificados en el método estándar.