Determinación de residuos de resina en saponinas de Panax Notoginseng mediante cromatógrafo de gases Wayeal GC6100

La cromatografía de gases juega un papel de vital importancia en la detección de residuos de resina en las saponinas de Panax notoginseng. Panax notoginsengLas saponinas sirven como materia prima central para fármacos cardiovasculares y cerebrovasculares como el Xueshuantong, y su proceso de purificación suele emplear resinas de adsorción macroporosas. Sin embargo, este proceso puede introducir residuos de disolventes orgánicos nocivos, incluidos n-hexano, benceno, tolueno, xileno, estireno y divinilbenceno. Estos residuos son potencialmente tóxicos para el cuerpo humano; por lo tanto, es esencial establecer métodos analíticos sensibles y precisos para un seguimiento estricto.

Este estudio se realizó de acuerdo con la última edición de la Farmacopea China, utilizando el cromatógrafo de gases Wayeal Technology GC6100 equipado con un detector de ionización de llama (FID) y acoplado con un muestreador de espacio de cabeza automatizado para la determinación de residuos de resina en muestras de saponina de Panax notoginseng.

Palabras clave: saponinas de Panax notoginseng; disolventes residuales; cromatografía de gases; detector FID; espacio de cabeza.

1. Método de experimento

1.1 Configuración del instrumento

Tabla 1 Lista de configuración del cromatógrafo de gases

1.2 Materiales experimentales y equipos auxiliares

Estándares de referencia: Materiales de referencia certificados de soluciones estándar de n-hexano, benceno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenceno y divinilbenceno (comprados internamente), almacenados en contenedores sellados, refrigerados y protegidos de la luz;

N,N-dimetilformamida;

Gas portador: Nitrógeno de alta pureza;

Generador de hidrógeno;

Generador de aire;

Muestreador de espacio de cabeza automatizado;

Viales de espacio de cabeza: Viales de vidrio con espacio de cabeza (20 ml).

1.3 Condiciones de prueba

1.3.1 Condiciones de referencia para el muestreador de espacio de cabeza

Temperatura del horno: 90°DO;

Tiempo de incubación: 30 min;

Temperatura de la válvula de inyección: 110°DO;

Temperatura de la línea de transferencia: 120°DO;

Volumen de inyección: 1,0 ml (volumen del asa).

1.3.2 Condiciones operativas de referencia para el cromatógrafo de gases

Columna analítica: columna capilar FFAP, 30 m×0,25 mm×0,25µmetro

Programa de temperatura: temperatura inicial de la columna de 60°C se mantuvo durante 16 minutos y luego aumentó a 200°C a razón de 20°C/min y se mantuvo durante 2 min;

Caudal de la columna: 1,0 ml/min;

Temperatura de entrada: 240°DO;

Temperatura del detector: 300°DO;

Caudal de aire: 300 ml/min;

Caudal de hidrógeno: 40 ml/min;

Caudal de maquillaje: 20 ml/min;

Inyección dividida con una relación de división de 2:1.

1.4 Preparación de la solución

1.4.1 Preparación de la solución madre estándar de referencia

Pesar con precisión cantidades apropiadas de los estándares de referencia de n-hexano, benceno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenceno y divinilbenceno y disolverlos en N,N-dimetilformamida para preparar una solución que contenga 20µg/mL de cada uno de n-hexano, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenceno y divinilbenceno, y 4µg/ml de benceno, respectivamente, que sirven como solución madre estándar de referencia.

1.4.2 Preparación de la solución estándar de trabajo mixta

Transfiera con precisión 2 ml de la solución madre del estándar de referencia a un matraz aforado de 50 ml, diluya a volumen con una solución de N,N-dimetilformamida al 25 % y mezcle bien. Transfiera con precisión 5 ml de esta solución a un vial con espacio de cabeza de 20 ml, ciérrelo y obtendrá la solución de trabajo estándar mixta.

1.4.3 Preparación de la solución estándar para la prueba del límite de detección

Transfiera con precisión 2 ml de la solución madre del estándar de referencia a un matraz volumétrico de 500 ml, diluya a volumen con una solución de N,N-dimetilformamida al 25 % y mezcle bien. Transfiera con precisión 5 ml de esta solución a un vial con espacio de cabeza de 20 ml, ciérrelo y obtendrá la solución estándar para la prueba del límite de detección.

2. Resultado y Discusión

2.1 Análisis cualitativo de estándares de referencia

Fig. 1 Cromatograma del disolvente en blanco

Fig. 2 Cromatograma de la solución de trabajo estándar mixta

Tabla 2 Parámetros cromatográficos de la solución de trabajo estándar mixta

Nota: Los cromatogramas anteriores muestran que todos los picos cromatográficos están bien separados entre sí, con resoluciones superiores a 1,5, cumpliendo con los requisitos para el análisis experimental.

2.2 Prueba de repetibilidad

Fig. 3 Cromatogramas superpuestos de la solución de trabajo estándar mixta para la prueba de repetibilidad (n=5)

Tabla 3 Parámetros cromatográficos de la solución de trabajo estándar mixta para la prueba de repetibilidad

Nota: La solución de trabajo estándar mixta se inyectó continuamente 5 veces y se midió la RSD de las áreas de los picos.≤1,5%.

2.3 Límite de detección

Fig. 4 Cromatograma de la solución estándar para la prueba de límite de detección

Tabla 4 Parámetros cromatográficos de la solución estándar para la prueba de límite de detección

Nota: El límite de detección (LOD) se determinó con una relación señal-ruido (S/N) de 3, y el límite de cuantificación (LOQ) se determinó con una relación señal-ruido (S/N) de 10. Se encontró que tanto el valor LOD como el LOQ cumplían con los requisitos de la norma.

2.4 Análisis de muestras

Pese con precisión aproximadamente 0,1 g de cada muestra (0,1017 g, 0,1026 gy 0,1023 g, respectivamente) en viales separados con espacio de cabeza de 20 ml, luego agregue con precisión 5 ml de solución de N,N-dimetilformamida al 25 % a cada vial, ciérrelo y agite bien para mezclar.

Fig. 5 Cromatogramas superpuestos de las tres soluciones de muestra

Fig. 6 Cromatogramas superpuestos de la solución de muestra y la solución estándar de referencia

Nota: No se detectó en las muestras nada de n-hexano, benceno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenceno o divinilbenceno.

3. Conclusión

En este estudio, se empleó un cromatógrafo de gases Wayeal GC6100 equipado con un detector de ionización de llama (FID) y acoplado con un muestreador de espacio de cabeza automatizado para la determinación de residuos de resina en muestras de saponina de Panax notoginseng. Los resultados experimentales demostraron que todos los picos cromatográficos estaban bien separados, con resoluciones superiores a 1,5, cumpliendo con los requisitos para los fines analíticos. Todos los resultados de las pruebas de repetibilidad y límite de detección de este método cumplieron con los requisitos especificados. No se detectó nada de n-hexano, benceno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenceno o divinilbenceno en las muestras de prueba, lo que indica resultados satisfactorios. Estos resultados demuestran que el cromatógrafo de gases Wayeal GC6100 es totalmente capaz de cumplir con los requisitos analíticos para la determinación de residuos de resina en muestras de saponina de Panax notoginseng.

4. Atención

Todas las operaciones que impliquen la preparación de disolventes y soluciones estándar, así como el pretratamiento de muestras, deben realizarse en una campana extractora. Se debe usar equipo de protección personal apropiado de acuerdo con las normas de seguridad del laboratorio para evitar el contacto con la piel y la ropa.