Determinación de residuos de antibióticos quinolónicos en carne de pollo mediante el sistema de espectrometría de masas por cromatografía líquida LCMS-TQ9200 de Wayeal (LC-MS/MS)
El Estándar Nacional de Seguridad Alimentaria de China "GB 31650-2019 Límites Máximos de Residuos para Medicamentos Veterinarios en Alimentos" especifica los límites máximos de residuos (LMR) de ciertos antibióticos quinolónicos en productos alimenticios de origen animal. Además, "GB 31658.17-2021 Estándar Nacional de Seguridad Alimentaria - Determinación de residuos de tetraciclinas, sulfonamidas y quinolonas en alimentos de origen animal por cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem" especifica el método analítico LC-MS/MS y los límites de cuantificación (LC) correspondientes para 13 antibióticos quinolónicos. Esta nota de aplicación presenta los resultados validados con éxito para el análisis de 13 residuos de antibióticos quinolónicos en carne de pollo utilizando el sistema de espectrometría de masas en tándem por cromatografía líquida de triple cuadrupolo LCMS-TQ9200 de Wayeal (LC-MS/MS).
Palabras clave: LC-MS/MS, quinolonas, residuos de medicamentos veterinarios, seguridad alimentaria.
Sistema de espectrometría de masas en tándem por cromatografía líquida Wayeal LCMS-TQ9200
Método de cromatografía líquida
Columna de cromatografía: C18 3.0x100mm
Fase móvil: A: ácido fórmico al 0,1% en metanol, B: solución de ácido fórmico al 0,1%
Caudal: 0,4 mL/min
Temperatura de la columna: 45°C
Volumen de inyección: 3 μL
Método de espectrometría de masas
Tabla 1 Parámetros de la fuente de iones de espectrometría de masas
| Fuente de iones |
ESI, modo de ion positivo |
| Voltaje de la fuente de iones |
5500V |
| Caudal de gas de desolvatación |
18000 mL/min |
| Caudal de gas nebulizador |
2000 mL/min |
| Caudal de gas de cortina |
5000 mL/min |
| Caudal de gas de colisión |
800 μL/min |
| Temperatura de desolvatación |
450°C |
| Temperatura del gas de cortina |
150°C |
Tabla 2 Parámetros de espectrometría de masas para cada compuesto
| Compuestos |
Q1 |
Q3 |
Potencial de desaglomeración (V) |
Energía de colisión (V) |
| Ácido oxolínico |
262.1 |
244* |
100 |
25 |
| 160 |
100 |
50 |
| Flumequina |
262.1 |
202 |
115 |
44 |
| 244.1* |
115 |
24 |
| Norfloxacina |
320.1 |
302.1* |
90 |
27 |
| 233.2 |
90 |
33 |
| Enoxacina |
321.2 |
234 |
100 |
38 |
| 303* |
100 |
30 |
| Ciprofloxacina |
332.2 |
231 |
100 |
49 |
| 288 |
100 |
25 |
| Pefloxacina |
334.1 |
316* |
110 |
29 |
| 233.2 |
110 |
35 |
| Lomefloxacina |
352.1 |
265.1* |
110 |
31 |
| 334 |
110 |
29 |
| Danofloxacina |
358.1 |
340.1* |
100 |
32 |
| 283.1 |
100 |
32 |
| Enrofloxacina |
360.2 |
316.1 |
110 |
27 |
| 245.1* |
110 |
38 |
| Ofloxacina |
362.1 |
318.3 |
75 |
25 |
| 261.2* |
75 |
34 |
| Marbofloxacina |
363.2 |
72.1* |
100 |
25 |
| 345.2 |
100 |
29 |
| Sarafloxacina |
386.1 |
299.1* |
110 |
38 |
| 342 |
110 |
27 |
| Difloxacina |
400.2 |
299.1 |
110 |
38 |
| 382.2 |
120 |
30 |
Nota: El ion marcado con * es el ion cuantitativo
1. Resultado del experimento
1.1 Forma del pico
La determinación de 13 antibióticos quinolónicos se completó en 11 minutos. Todos los picos tenían buenas formas de pico sin el fenómeno común de colade los antibióticos quinolónicos. Todos los compuestos demostraron fuertes respuestas de señal, cumpliendo con los requisitos para la cuantificación experimental.
Fig. 1 Cromatograma de 13 antibióticos quinolónicos
1.2. Rango lineal
Se diluyó en serie una cantidad adecuada de solución estándar mixta de quinolonas para preparar estándares de calibración que abarcaban concentraciones de 2 a 500 ng/mL. La evaluación de la linealidad demostró una excelente concordancia con las concentraciones nominales, con todas las desviaciones dentro del error máximo permisible. El coeficiente de determinación (R²) osciló entre 0,9921 y 0,9998, lo que confirma una linealidad satisfactoria para todos los componentes.
Tabla 3 Tabla de rango lineal
| Compuestos |
Rango lineal |
Coeficiente de correlación lineal R2 |
| Ácido oxolínico |
2-500 ng/mL |
0.9989 |
| Flumequina |
2-500 ng/mL |
0.9988 |
| Norfloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9968 |
| Enoxacina |
2-500 ng/mL |
0.9989 |
| Ciprofloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9982 |
| Pefloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9992 |
| Lomefloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9921 |
| Danofloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9969 |
| Enrofloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9998 |
| Ofloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9941 |
| Marbofloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9997 |
| Sarafloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9946 |
| Difloxacina |
2-500 ng/mL |
0.9973 |
Fig. 2 Resultados del rango lineal para antibióticos quinolónicos seleccionados
1.3. Límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ)
El Estándar Nacional de Seguridad Alimentaria GB 31658.17-2021 especifica un límite de detección (MDL) de 2 μg/kg y el límite de cuantificación (MQL) de 10 μg/kg. En este método, todos los compuestos objetivo demostraron relaciones señal-ruido significativamente mayores a 3 a 2 μg/kg y 10 a 10 μg/kg, cumpliendo totalmente con los requisitos de sensibilidad especificados en el estándar nacional.
Tabla 4 Relaciones señal-ruido para los límites de detección y cuantificación de los compuestos objetivo
| Compuesto |
SNR (S/N) |
| 2 μg/kg |
10 μg/kg |
| Ácido oxolínico |
111.26 |
359.11 |
| Flumequina |
59.64 |
244.73 |
| Norfloxacina |
70.16 |
392.57 |
| Enoxacina |
23.74 |
80.26 |
| Ciprofloxacina |
37.91 |
99.26 |
| Pefloxacina |
28.70 |
125.81 |
| Lomefloxacina |
48.54 |
165.84 |
| Danofloxacina |
105.74 |
348.10 |
| Enrofloxacina |
35.97 |
120.82 |
| Ofloxacina |
51.67 |
287.26 |
| Marbofloxacina |
190.11 |
399.38 |
| Sarafloxacina |
38.11 |
160.79 |
| Difloxacina |
25.85 |
149.29 |
Fig. 3 Cromatogramas LOD/LOQ para quinolonas seleccionadas
1.4. Pruebas de precisión
Se inyectó una solución estándar mixta de antibióticos quinolónicos a tres concentraciones (10, 50 y 100 ng/mL) durante 6 veces para comparar las variaciones del tiempo de retención y el área del pico. Como se muestra en la tabla a continuación, todos los compuestos de quinolonas analizados demostraron desviaciones del tiempo de retención inferiores al 0,3% y desviaciones del área del pico inferiores al 5%, cumpliendo totalmente con el requisito del estándar nacional de RSD ≤15% para la precisión.
Tabla 5 Pruebas de precisión de varios compuestos
Fig. 4 Cromatogramas de precisión de compuestos seleccionados
2. Conclusión
Este método empleó el sistema de espectrometría de masas en tándem por cromatografía líquida Wayeal LCMS TQ9200 para la determinación de antibióticos quinolónicos en muestras de pollo. Los datos experimentales demostraron un excelente rendimiento cromatográfico con formas de pico bien definidas y ausencia de cola para todos los analitos, al tiempo que cumplían con los requisitos de sensibilidad especificados en los estándares nacionales. El método exhibió una buena linealidad con coeficientes de correlación (R²) superiores a 0,99 para todas las curvas de calibración, junto con una excelente reproducibilidad, como lo demuestran las desviaciones del tiempo de retención inferiores al 0,3% y las variaciones del área del pico inferiores al 5%. El análisis de tres lotes de muestras de pollo preparados de forma independiente no mostró residuos detectables de antibióticos quinolónicos. Estos resultados confirman que el método analítico, junto con el sistema Wayeal LC-MS/MS, es totalmente capaz de cumplir con los requisitos de detección cualitativa y cuantitativa de rutina para los analitos objetivo en las muestras de prueba.
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