Determinación de impurezas de nitrosaminas en comprimidos de clorhidrato de propranolol por cromatografía líquida

Palabras clave: Propranolol, cromatografía líquida de alto rendimiento, impurezas de nitrosaminas

1. Instrumentos y reactivos

1.1 Lista de configuración del sistema HPLC

1.2 Reactivos y soluciones estándar

Tabla 2 Reactivos y soluciones estándar

1.3 Materiales experimentales y equipos auxiliares

Limpiador ultrasónico

Mezclador Vortex

2. Método experimental

2.1 Preparación de la solución

2.1.1 Solución de hidróxido de sodio 2mol/L: Tomar 4 g de hidróxido de sodio, disolver en 50 ml de agua y mezclar bien.

2.1.2 Mezcla de acetonitrilo-agua-ácido sulfúrico (55:45:0.1): Tomar 1.6 g de lauril sulfato de sodio y 0.31 g de fosfato dihidrógeno de tetrabutilamonio, agregar 1 ml de ácido sulfúrico, 450 ml de agua y 550 ml de acetonitrilo. Ajustar a pH 3.3 con solución de hidróxido de sodio 2 mol/L y mezclar bien.

2.1.3 Disolvente: Igual que la fase móvil.

2.1.4 Solución lineal: Pesar con precisión una cantidad apropiada del estándar de referencia de N-Nitroso-propranolol, disolver y diluir con la fase móvil para obtener una solución que contenga aproximadamente 200 ng por 1 ml como solución madre estándar. Luego, transferir con precisión volúmenes apropiados de la solución madre a seis matraces aforados de 100 ml, diluir hasta la marca con la fase móvil y mezclar bien para preparar una serie estándar de curvas de trabajo con concentraciones de 0.8 ng/ml, 1 ng/ml, 2 ng/ml, 3 ng/ml, 4 ng/ml y 6 ng/ml.

2.1.5 Solución estándar de referencia: Pesar con precisión una cantidad apropiada del estándar de referencia de N-Nitroso-propranolol, disolver y diluir con la fase móvil para preparar una solución que contenga aproximadamente 2 ng de N-Nitroso-propranolol por 1 ml como solución estándar de referencia.

2.2 Preparación de la muestra

2.2.1 Solución de muestra: pesar con precisión una cantidad apropiada de comprimidos de clorhidrato de propranolol finamente pulverizados, disolver y diluir con la fase móvil para preparar una solución que contenga aproximadamente 0.27 mg de propranolol por 1 ml como solución de muestra.

2.2.2 Solución de precisión: pesar con precisión aproximadamente 297 mg de comprimidos de clorhidrato de propranolol finamente pulverizados en un matraz aforado de 100 ml. Agregar una cantidad apropiada de solución estándar de referencia de N-Nitroso-propranolol, disolver y diluir hasta la marca con la fase móvil para preparar una muestra enriquecida al 100%. Mezclar bien para obtener la solución de precisión.

3. Resultado del experimento

3.1 Especificidad

Fig 2 Cromatograma de especificidad

Nota: El disolvente no interfiere con la detección de N-Nitroso-propranolol, y los picos cromatográficos de otras impurezas en la solución de prueba tampoco interfieren con la determinación de la impureza N-Nitroso-propranolol.

3.2 Prueba lineal

Fig 3 Curva estándar de la impureza N-Nitroso-propranolol

Nota: Los resultados experimentales muestran que el coeficiente de correlación (R) de la curva de prueba de impurezas de N-Nitroso-propranolol supera 0.999, cumpliendo con los requisitos de la prueba.

3.3 Prueba de repetibilidad

Fig 4 Cromatogramas de seis inyecciones replicadas para el estándar de 2 ng/ml

Tabla 3 Datos de seis inyecciones replicadas para el estándar de 2 ng/ml

Nota: Como se muestra en la tabla anterior, la repetibilidad del tiempo de retención de N-nitroso-propranolol es 0.043%, y la repetibilidad del área del pico es 0.464%, lo que indica una buena repetibilidad.

3.4 Prueba de precisión

Fig 5 Cromatogramas de precisión superpuestos de N-Nitroso-propranolol en comprimidos

Tabla 4 Precisión de los comprimidos de clorhidrato de propranolol (N-Nitroso-propranolol)

Nota: La recuperación de N-Nitroso-propranolol en seis muestras osciló entre 96.98% y 104.71%, con una recuperación promedio de 101.38%. El método muestra buena precisión y repetibilidad.

3.5 Prueba LOD

Fig 6 Cromatograma de prueba de N-Nitroso-propranolol a una concentración estándar de 2 ng/ml

Tabla 5 Datos de prueba de referencia de N-Nitroso-propranolol a una concentración estándar de 2 ng/ml

Nota: Basado en los datos de prueba para el estándar de referencia de N-nitroso-propranolol a una concentración de 2 ng/ml en la tabla anterior, el límite de detección teórico para N-nitroso-propranolol se calcula como 0.151 ng/ml utilizando una relación señal-ruido de 3:1 como criterio de límite de detección.

3.6 Prueba de comprimidos de una marca

Fig 7 Cromatograma de prueba de comprimidos de una marca

Nota: No se detectó N-Nitroso-propranolol en los comprimidos de la marca.

4. Conclusión

Se realizó un estudio sobre la impureza de nitrosamina N-nitroso-propranolol en comprimidos de clorhidrato de propranolol de acuerdo con el documento de orientación publicado recientemente por la FDA sobre el establecimiento de niveles de ingesta aceptables para las impurezas relacionadas con los fármacos de nitrosamina (NDSRI). De acuerdo con este documento, el valor de IA (Ingesta Aceptable) se calcula como 1500 ng/día. Teniendo en cuenta la dosis diaria máxima de este producto (200 mg), el límite de control en los comprimidos no debe exceder las 7.5 ppm. La validación del método se realizó utilizando la serie de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) de Wayeal equipada con un detector UV. Se analizaron muestras de comprimidos utilizando el método de detección validado y no se detectó la impureza de nitrosamina N-nitroso-propranolol. Todos los datos anteriores cumplen con los requisitos farmacopeicos de instrumentación.