Determinación de los residuos de β-agonistas en carne de cerdo mediante el sistema Wayeal LCMS-TQ9200 de cromatografía líquida y espectrometría de masa en tándem

Este experimento se refiere a "GB 31658.22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkLos resultados experimentales indican que el ensayo de idoneidad del sistema demostró picos de buena forma y buena linealidad, cumpliendo con los requisitos experimentales.La repetibilidad del tiempo de retención para la solución de trabajo estándar del β-agonista fue inferior al 1%.Para la solución de ensayo de sensibilidad de los β-agonistas, las relaciones señal-ruido de los picos principales en concentraciones de 0.2ng/ ml y 0,5ng/ ml fueron significativamente superiores a 3 y 10, respectivamente, cumpliendo con los requisitos experimentales.

No se detectaron β-agonistas en el ensayo de muestras de carne de cerdo..

Palabras clave:Espectrometría de masa de cromatografía líquida-tandem; β-agonistas; clenbuterol; seguridad alimentaria.

1Instrumentos y reactivos

1.1 Lista de configuraciones del LCMS

Cuadro 1 Lista de configuraciones de los instrumentos

1.2 Reactivos y estándares

Cuadro 2 Lista de reactivos y normas

1.3 Material experimental y equipo auxiliar

Limpiador ultrasónico

Mixer de vórtices

Baño de agua de temperatura constante agitador

Centrífuga de alta velocidad

2Método de experimento

2.1 Tratamiento previo de las muestras

2.1.1 Hidrólisis y extracción enzimáticas

Pesar 2 g de la muestra (con una precisión de ± 0,05 g) en un tubo centrífugo de 50 ml. Añadir 6 ml de solución tampón de acetato de amonio de 0,2 mol/l y 40 μl de β-glucuronidasa/arilsulfatasa.y incubar a 37 °C en la oscuridad con agitación en un baño de agua durante 16 horas. Dejar enfriar a temperatura ambiente para su uso posterior.

2.1.2 Extracción, purificación y concentración

Se toma la solución preparada, se añade 100 μL de la solución de trabajo estándar interna de 100 ng/mL, se mezcla con el vórtice y se centrifuga a 8000 r/min durante 8 minutos. Se recoge el supernatante, se añade 5 mL de 0.1 mol/l de solución de ácido perclóricoDespués de centrifugar a 8000 r/min durante 8 minutos, ajustar el pH del supernatante a 10 ± 0.5 utilizando una solución de hidróxido de sodio de 10 mol/l. Añadir 15 ml de acetato de etilo, agitar a velocidad media durante 5 minutos y centrifugar a 5000 r/min durante 5 minutos. Recoger la capa orgánica superior.añadir 10 ml de éter metil tert-butilo, agitar a velocidad media durante 5 minutos, centrifugar a 5000 r/min durante 5 minutos, recoger la capa orgánica superior, combinar todas las capas orgánicas y evaporar hasta secarse bajo una corriente de nitrógeno a 50 °C.Disolver el residuo en 5 ml de solución de ácido fórmico al 2% y dejar a un ladoPreparar una columna de extracción de fase sólida de intercambio de cationes de modo mixto activándola secuencialmente con 3 ml de metanol y 3 ml de ácido fórmico al 2%.enjuagarse secuencialmente con 3 ml de ácido fórmico al 2% y 3 ml de metanol, se secan al vacío. Elútense las columnas con 3 ml de solución de metanol amoniado al 5%. Evaporarse el eluado hasta secarse bajo una corriente de nitrógeno a 50 °C. Se vuelve a disolver el residuo en 0,5 ml de metanol.Solución de ácido fórmico al 1% (10:90, v/v), mezclar a fondo y filtrar a través de una membrana microporousa de 0,22 μm para su análisis mediante cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem.

2.2 Condiciones de los experimentos

2.2.1 Condiciones cromatográficas líquidas

Columna de cromatografía C18, 1,8 μm 2.1*100 mm

Fase móvil: A: 0,1% de ácido fórmico en agua; B: metanol

Velocidad de flujo: 0,3 ml/min

Temperatura de las columnas: 40°C

Volumen de la inyección: 3μL

3Prueba de idoneidad del sistema

El ensayo de idoneidad del sistema muestra que los picos objetivo tienen una buena forma sin interferencias de otros picos de impurezas, cumpliendo los requisitos experimentales.

Figura 1 Cromatograma de prueba de siete β-agonistas (1 ng/mL)

3.2 Alcance lineal

Tomando soluciones estándar de β-agonistas y utilizando soluciones de trabajo de concentración intermedia, se preparó gradualmente una curva estándar.con R2 > 0.99, lo que indica una buena relación lineal.

Cuadro 3 Cuadro de intervalos lineales para los β-agonistas

Figura 2 Cromatograma de curva estándar de siete β-agonistas

3.3 Límites de detección (LOD) y de cantidad (LOQ)

En este método, el límite de detección (LOD) y el límite de cuantificación (LOQ) para los β-agonistas se establecen en 0,2 ng/mL y 0,5 ng/mL, respectivamente.la relación señal-ruido a las concentraciones especificadas para LOD y LOQ es superior a 3 y 10 respectivamente;, respectivamente, que cumplen los requisitos de sensibilidad experimental.

Cuadro 4 Relaciones señal-ruido correspondientes para LOD y LOQ de cada compuesto

Figura 3 Cromatogramas iónicos de siete β-agonistas a concentraciones LOD y LOQ

3.4 Prueba de precisión

Se tomó una solución mixta de sustancias estándar β-agonistas en concentraciones bajas, medianas y altas e inyectada seis veces consecutivas para comparar el tiempo de retención y las desviaciones de la zona pico.Los resultados se muestran en el cuadro siguienteTodos los β-agonistas mostraron desviaciones de tiempo de retención inferiores al 1% y desviaciones de área de pico inferiores al 3%, cumpliendo con los requisitos experimentales.

Cuadro 5 Prueba de precisión para cada compuesto

Figura 4Cromatogramas de ensayo de precisión de siete β-agonistas (6 inyecciones)

3.5 Prueba de muestras

Las muestras de carne de cerdo compradas en el mercado fueron examinadas con arreglo al método de pretratamiento mencionado y no se detectaron agonistas β.No se observaron picos cromatográficos en los tiempos de retención correspondientes a los siete β-agonistas., mientras que los otros picos representan las señales de la matriz después de la hidrólisis enzimática.

Figura 5 Cromatograma de prueba de muestras de carne de cerdo

4Conclusión

Este método utiliza el sistema Wayeal LCMS-TQ9200 de cromatografía líquida y espectrometría de masas en tándem para la determinación de β-agonistas en carne de cerdo.Los datos demuestran que todos los picos cromatográficos presentan una buena forma sin cola, la sensibilidad cumple los requisitos experimentales, los coeficientes de correlación lineal superan 0.99, y la precisión es satisfactoria con desviaciones del tiempo de retención inferiores al 1% y desviaciones del área de pico dentro del 3% para seis inyecciones consecutivas de cada compuesto.No se detectaron β-agonistas en las pruebas de muestras de carne de cerdoEstos resultados indican que el método, equipado con el sistema Wayeal LC-MS/MS, cumple los requisitos de detección cualitativa y cuantitativa de rutina para los analizados objetivo.